Thin Layer Chromatography

Thin Layer Chromatography (TLC) နည္းသည္ Paper Chromatography (PC) တြင္အသံုးျပဳေသာ Stationary Phase အျဖစ္ စကၠဴအစား ပါးလႊာေသာ Silica gel သုိ႕မဟုတ္ Alumina ကို coating လုပ္ထားေသာ သတၱဳျပား အသံုးျပဳျခင္း ျဖစ္သည္။ TLC နည္းသည္ PC နည္းထက္ Resolution ပိုေကာင္းၿပီၤး၊ ျဒပ္ေႏွာမ်ား ခြဲျခားရာတြင္လည္း ပိုျမန္သည္။ 

Thin Layer Chromatography

PC တြင္ Stationary Phase အျဖစ္ စကၠဴ အသံုးျပဳၿပီး၊ TLC တြင္ စီလီကာဂ်ယ္ သို႕မဟုတ္ အလူမီနာ သုတ္လိမ္းထားေသာ သတၱဳျပားကို အသံုးျပဳသည္။ Mobile Phase အျဖစ္ ခြဲျခားလိုေသာ ျဒပ္ေႏွာေပၚမူတည္၍ သင့္ေလွ်ာ္ေသာ ေဖ်ာ္ရည္ ( Solvent ) ကိုအသံုးျပဳၿပီး၊ ၄င္းသည္ Stationary Phase ေပၚတြင္ ျဒပ္ေႏွာကို သယ္ေဆာင္သြားသည္။ ျဒပ္ေႏွာတြင္ ပါ၀င္ေသာ ပါ၀င္ပစၥည္းမ်ား၏ ေရြ႕လ်ားႏုိင္မႈ႕သည္ ၄င္းတို႕၏ ေမာ္လီက်ဴ အေလးဆေပၚ မူတည္သည္။ 

အမ်ိဳးအမည္ မသိေသာ အမိုင္ႏိုအက္စစ္ကို TLC နည္းျဖင့္ ေျဖရွင္းျခင္း။

မိမိအလိုရွိသေလာက္ TLC ျပားကို ျဖတ္ေတာက္ၿပီး၊ အမိုင္ႏိုအက္စစ္မ်ား ေနရာခ်ထားရန္ မ်ဥ္းတားေပးရသည္။ မ်ဥ္းတားရန္အတြတ္ ခဲဆံကို အသံုးျပဳသည္။ မွင္ကို အသံုးမျပဳရျခင္းမွာ Solvent သည္ ျဒပ္ေႏွာႏွင့္အတူ မွင္ကို သယ္ေဆာင္သြားႏုိင္ျခင္းေၾကာင့္ ျဖစ္သည္။

         အစက္ခ်ေနစဥ္

အမ်ိဳးအမည္ မသိေသာ အမိုင္ႏိုအက္စစ္မ်ားကို ဆံခ်ည္မွ်င္ျပြန္ႏွင့္ မ်ဥ္းတားထားေသာ ခဲလိုင္း၏ အလည္တြင္ တစ္စက္ျခင္း သီးျခား အစက္ခ်ၿပီး၊ မ်ဥ္းထားထားေသာ အပိုင္းကို Ninhydrin ထည့္ထားသည္႕ ဖန္ပုလင္း၏ ေအာက္ေျခတြင္ထားကာ အေငြ႕မပ်ံႏုိင္ေအာင္ အဖံုး ဖံုးသည္။

Ninhydrin သည္ TLC ျပားေအာက္ေျခမွ စတင္ၿပီး စိမ့္၀င္ပ်ံ႕ႏွံ႕ကာ အမိုင္ႏိုအက္စစ္မ်ားကို အေပၚသို႕ သယ္ေဆာင္သြားသည္။ ေနာက္ဆံုး TLC ျပားတြင္ အမိုင္ႏုိအက္စစ္မ်ား၏ အေရာင္ကို ကြဲျပားျခားနားစြာ ေတြ႕ျမင္ရသည္။ ထိုအခါ ၄င္းတို႕သည္ မည္သည္႕ ျဒပ္ေပါင္း ျဖစ္ေၾကာင္း သက္ေသျပရန္ R_f တန္ဖိုး တြတ္ထုတ္ယူရသည္။ 

R_f တန္ဖိုး တြတ္ယူရန္ စေပါ့၏ အလည္ႏွင့္ ခဲတားထားေသာလိုင္းအကြာအေ၀းကို ခဲတားထားေသာ မ်ဥ္းမွ TLC ျပားေပၚတြင္ Solvent ျဖတ္သန္းသြားေသာ အကြားအေ၀းျဖင့္ စားသည္။ စား၍ရေသာကိန္းကို စံအျဖစ္ထားေသာ R_f တန္ဖိုးမ်ားႏွင့္ ႏိႈင္းယွဥ္ၿပီး၊ မည္သည္႕ ျဒပ္ေပါင္း ျဖစ္ေၾကာင္းသိႏုိင္သည္။

 

အမိုင္ႏုိအက္စစ္မ်ားသည္ Ninhydrin ႏွင့္ ထိေတြ႕ေသာအခါ သီးျခား အေရာင္မ်ား ေပးႏုိင္သည္။ ထိုအေရာင္မ်ားကို ၾကည္႕ျခင္းျဖင့္ မည္သည္႕ အမိုင္ႏိုအက္စစ္ ျဖစ္ေၾကာင္း သိႏုိင္သည္။

တစ္ခါတစ္ရံ TLC ျပားတြင္ ျဒပ္ေႏွာ၏ ပါ၀င္ပစၥည္းမ်ားႏွင့္ Solvent ေပၚမူတည္၍  ျဒပ္ေပါင္းးမ်ား၏ အေရာင္ကို မေတြ႕ျမင္ရေပ။ ထိုအခါ TLC ျပားကို Fluorescence လုပ္ေပးရသည္။ Fluorescense လုပ္ျခင္းဆိုသည္မွာ TLC ျပားကို ခရမ္းလြန္ေရာင္ျခည္ ( Ultraviolet  ) ႏွင့္ ထိေတြ႕ေစျခင္းျဖစ္သည္။ ထိုအခါ TLC ေပၚရွိ Compound မ်ား၏ အေရာင္ကို ထင္ရွားစြာ ေတြ႕ျမင္ႏုိင္သည္။ Florescence အျဖစ္ အုိင္အိုဒင္းဓာတ္ေငြ႕ သို႕မဟုတ္ အီသာကိုလည္း သံုးႏုိင္သည္။